Dag 4
Nu har du gjort både PCR och
Southern. Syftet med bägge metoderna var att ta reda på om LL 37-genen fanns i
plasmiden. Jämför resultatet och diskutera för-och nackdelar med metoderna.
PCR
resultaten visade på att insertet innehöll LL37 för provet med 0,5μg klyvd
plasmidlösning men inte för 0,005μg klyvd plasmidlösning. Detta gjorde Southern,
vilket gör att metoden är känsligare och kan användas för att detektera små
mängder. Southern visade att vi hade en del oklyvd plasmid även i proven med de
klyvda plasmidproverna och detta kunde vi inte se med PCR men det var kanske
inte heller så viktigt då syftet var att bekräfta att vi hade LL37. PCR går
fortare än Southern, den sistnämnda innehåller fler moment och erbjuder fler
tillfällen för fel.
Vad tycker du är det viktigaste
som du har lärt dig under laborationen?
Det
viktigaste jag har lärt mig är att arbeta med många olika moment samtidigt och
att planera laborationen så att jag kan vara så effektiv som möjligt.
Hej Stina!
SvaraRaderaDu är inte den enda som blandat ihop elektrofores av klyvd plasmid med PCR. Titta igen på var du kan se resultat av PCR, och jämför med resultatet efter detektion av probe. Det är omöjligt för mig att jämföra eftersom du inte har visat några bilder på dina resultat, men jag skulle tro att du får ett annat svar på frågan vilken metod som är känsligast.
Kan du (eller någon som kommenterar bloggen) komma på någon annan nackdel med PCR?
Märit
Hej Stina
SvaraRaderajag tycker din blog är skriven bra, har även läst märits kommentar och jag förstår den inte riktigt, skulle vara skönt att få en bättre förklaring. då jag också tycker southern var känsligare med tanke på att den kan detektera mindra mängder. Dock kan det betyda att vi tolkar ordet känsligt på olika sätt.